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技術(shù)文獻

血液RNA提取方法及注意事項
閱讀次數(shù)：2837 發(fā)布時間：2019/2/18 9:44:28

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血液RNA提取的方法可以細分為需要預(yù)先處理和不需要預(yù)先處理兩類。

眾所周知，人和其他哺乳動物血液只有白細胞（不到總數(shù)的 5%）等少量細胞含有RNA，需要預(yù)先處理的血液 RNA 提取法其實就是分離白細胞再提取RNA，本質(zhì)上是白細胞RNA提取。分離白細胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度離心法（白細胞在 Buffy Coat 中)和紅細胞裂解法。由于預(yù)處理操作會劇烈改變血液RNA含量（British J. Haematol.， 126:231， 2004），所以無預(yù)處理提取法將是未來提取血液RNA的發(fā)展方向。

白細胞RNA提取和全血RNA提取都需注意以下問題：

一、血液越新鮮越好，因血液細胞內(nèi)外都有大量 RNase，容易使RNA降解。血液在 4℃的放置時間不要超過四天；

二、盡可能抑制或滅活血液特有的RNase（如 EDN， ECP），因為它們不但跟 RNase A 一樣非常穩(wěn)定，而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC 抑制，還能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，它們殘留在RNA樣品中不但會降解RNA，還會干擾后續(xù)的RT-PCR反應(yīng)；

三，血液富含糖蛋白，粘蛋白和血紅蛋白，提取需要去除糖蛋白污染；

四，由于RNA量少，提取時很容易丟失，可以適當使用核酸沉淀助沉劑；

五，血液細胞量隨生理病理因素變化波動性大，注意調(diào)整血液和提取試劑的*佳用量。 *簡單的方法是使用已經(jīng)經(jīng)過廠家優(yōu)化的產(chǎn)品，比如用于白細胞RNA提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和xuanya的動物 RNAOUT；用于全血RNA 提取的 TRIzol LS，PAXgene Blood RNA Kit 和xuanya的全血RNAOUT和柱式血液RNAOUT。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司