1. 怎樣購(gòu)買份量合適數(shù)量的慢病毒顆粒？一套完整實(shí)驗(yàn)所需的慢病毒顆粒包括：1. 含有目的基因的慢病毒顆粒，2. 陰性對(duì)照慢病毒顆粒，3. 用于預(yù)實(shí)驗(yàn)的陽性對(duì)照慢病毒顆粒。
購(gòu)買時(shí)可以根據(jù)目的
細(xì)胞特性、檢測(cè)方法、培養(yǎng)器皿估算慢病毒顆粒的*佳用量，避免剩余的大量慢病毒顆粒超出*佳保存期；此外，GeneCopoeiaTM 同時(shí)提供高滴度低價(jià)格的陽性對(duì)照慢病毒顆粒，幫助您以較低的預(yù)算和較充足的材料完成預(yù)實(shí)驗(yàn)的條件探索。初次使用慢病毒顆粒的研究者也可使用陽性對(duì)照慢病毒顆粒熟悉實(shí)驗(yàn)過程。
2. 慢病毒顆粒可以用于動(dòng)物體內(nèi)（In vivo）實(shí)驗(yàn)嗎？GeneCopoeiaTM 提供的即用型慢病毒顆粒全部經(jīng)過純化、濃縮處理，去除了細(xì)胞碎片等雜質(zhì)，進(jìn)一步降低免疫原性，適用于各類活體動(dòng)物注射實(shí)驗(yàn)和成瘤實(shí)驗(yàn)。
3. 慢病毒顆粒對(duì)目的細(xì)胞的感染效率很低，如何提高感染效率？提高感染效率的前提是保證細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。其次，可以通過提高 MOI 值來提高感染效率，也可以在
培養(yǎng)基中加入 Polybrene (4-10 µg/mL) 提高感染效率。
4. 添加慢病毒顆粒后，細(xì)胞為什么大量死亡?慢病毒顆粒對(duì)靶細(xì)胞有一定毒性。添加量過多、感染時(shí)間過長(zhǎng)都可能對(duì)目的細(xì)胞 造成傷害。如遇上這種情況，建議您降低 MOI 值，并在感染細(xì)胞 4-8 小時(shí)后進(jìn)行換 液（以新鮮的全培養(yǎng)基替換含慢病毒顆粒的舊培養(yǎng)基），*長(zhǎng)換液時(shí)間不可大于 12 小時(shí)。
5.Polybrene 是什么？在慢病毒顆粒感染中，Polybrene 添加越多越好嗎？Polybrene 是常用的感染添加劑，通常的使用濃度為 4-10 µg/mL，Polybrene 能 顯著提高慢病毒的感染效率，通常能提高感染效率 2-10 倍，對(duì)部分細(xì)胞甚至可 提高感染效率 10-20 倍。當(dāng)目的細(xì)胞 MOI 高于 20 時(shí)，我們建議在培養(yǎng)基中加入 Ploybrene(約 4-10 µg/mL) 適當(dāng)提高感染效率。
然而，Polybrene 有一定的細(xì)胞毒性，不同細(xì)胞對(duì) Polybrene 的敏感度和耐受性不同，部分細(xì)胞對(duì) Polybrene 反應(yīng)明顯，容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差、形態(tài)發(fā)生變化、甚至死亡，因此并非每種細(xì)胞都適合添加 Polybrene。
在正式使用 Polybrene 前，建議在 1-10 µg/mL 范圍內(nèi)設(shè)置梯度，觀察細(xì)胞在該濃度下，24 小時(shí)后是否仍保持健康生長(zhǎng)，從而確定該細(xì)胞的*適 Polybrene 濃度。
6. 目的細(xì)胞可以被慢病毒顆粒感染，但 eGFP 的熒光強(qiáng)度很低，為什么？在目的細(xì)胞被慢病毒顆粒感染過程中，eGFP 熒光強(qiáng)度取決于病毒感染細(xì)胞內(nèi)的慢病毒顆粒數(shù)、細(xì)胞本身的狀態(tài)、細(xì)胞類型以及觀察時(shí)間等。一般情況下，目的細(xì)胞感染慢病毒顆粒數(shù)越多，細(xì)胞增殖越快，eGFP 熒光會(huì)較強(qiáng)。慢病毒攜帶基因表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)，一般在增殖較快的細(xì)胞中也需要感染 72-96 小時(shí)才會(huì)到達(dá) eGFP 的表達(dá)高峰。對(duì)于增殖較慢的細(xì)胞，感染時(shí)間則需更長(zhǎng)。建議如果您的細(xì)胞在感染后觀察的熒光強(qiáng)度較低，建議繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間再觀察。
7. 進(jìn)行慢病毒顆粒感染后，為什么目的細(xì)胞用 qPCR 檢測(cè)不到目的基因表達(dá)量的變化？如果使用的檢測(cè)方法是 qPCR，原因可能是目的基因含特殊序列結(jié)構(gòu)、或與目的細(xì)胞系統(tǒng)不能兼容的問題，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄受影響，建議同時(shí)培養(yǎng)、感染目的細(xì)胞和 293T 工具細(xì)胞，同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，如目的基因在 293T 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄不受影響，則可能為目的基因與目的細(xì)胞的相互作用導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄受阻。
8. 慢病毒顆粒在儲(chǔ)存期間不慎染菌，還可以繼續(xù)使用嗎？如慢病毒顆粒不慎染菌，且實(shí)驗(yàn)材料有限，可以使用 0.45 µm 濾膜對(duì)慢病毒進(jìn)行濾菌操作。當(dāng)然，該操作會(huì)導(dǎo)致一定程度的滴度損失及慢病毒顆粒總量損失。如條件允許，建議重新購(gòu)買該種慢病毒。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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