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技術(shù)文獻(xiàn)

酵母計(jì)數(shù)和活性怎么測(cè)？用它！
閱讀次數(shù)：1578 發(fā)布時(shí)間：2020/7/1 10:01:47

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酵母菌簡介：

酵母菌是基因克隆實(shí)驗(yàn)中常用的真核生物細(xì)胞，也是食品工藝中常用的微生物，如釀酒酵母。

酵母菌細(xì)胞寬度（直徑）約2~6μm，長度5~30μm，有的則更長，個(gè)體形態(tài)有球狀、卵圓、橢圓、柱狀和香腸狀等。由于其尺寸較小，形狀不規(guī)則，因此采用明場(chǎng)法無法進(jìn)行準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)，更不易進(jìn)行酵母活性的檢測(cè)！

采用雙熒光通道設(shè)計(jì)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，可更加準(zhǔn)確地進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活性分析。

接下來我們看一下它是如何進(jìn)行酵母計(jì)數(shù)和活性檢測(cè)的吧？

步驟一：FDA/PI染色

取1?l FDA試劑、1?l PI試劑加入到18?l酵母菌液中，避光孵育10min。

FDA/PI試劑染色原理介紹：FDA是一種非熒光性疏水性熒光素衍生物，它可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，通過細(xì)胞內(nèi)酯酶催化水解二乙酸酯基團(tuán)產(chǎn)生具有高熒光強(qiáng)度的熒光素。因此活細(xì)胞具有綠色熒光。無活性的死細(xì)胞被PI著色，發(fā)出紅色熒光。因此，可以很好的辨別死細(xì)胞與活細(xì)胞，準(zhǔn)確的進(jìn)行細(xì)胞活性的檢測(cè)。

步驟二：上樣

用移液槍吸取10?l 樣品加入到細(xì)胞計(jì)數(shù)板中。

將細(xì)胞計(jì)數(shù)板插入到LUNA FL中。

步驟三：檢測(cè)

直接點(diǎn)擊內(nèi)置的酵母檢測(cè)App

在明場(chǎng)下進(jìn)行調(diào)節(jié)焦距，然后點(diǎn)擊Count即開始細(xì)胞檢測(cè)，30秒內(nèi)即可完成。

步驟四：結(jié)果查看、分析、導(dǎo)出

結(jié)果查看：

我們可以得到Total /Live /Dead細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活性、細(xì)胞平均尺寸等數(shù)據(jù)。

結(jié)果分析：

我們可以設(shè)置細(xì)胞分析的尺寸范圍以及聚團(tuán)情況等。

結(jié)果導(dǎo)出：

點(diǎn)擊Save/Print即可將結(jié)果導(dǎo)出，您可以選擇保存3個(gè)通道的原始圖片、加了Tag的圖片、包含了該次檢測(cè)所有信息的PDF文件。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司