1.實驗安排
實驗準備；
采樣、恒溫培養富集及初篩；
觀察產氣情況及稀釋、倒培養基、劃線、涂布、倒置培養；
鑒定、接種；
菌種保藏。
2.具體操作步驟實驗準備
①配置培養基(伊紅美蘭瓊脂培養基：7.4g+200mL無菌水、調pH7.2～7.4，營養瓊脂培養基：6.6g+200mL無菌水、調pH7.4±0.2,0.85%生理鹽水、乳糖膽鹽液體培養基2.6g+100mL無菌水，調pH7.4±0.2),裝瓶，高壓蒸汽滅菌。
②包扎好培養皿，移液管，試管，進行干熱滅菌。
③將配好的乳糖膽鹽液體培養基分裝入三個試管中，每個大約十毫升，包扎，滅菌。
④液體石蠟和涂布棒等其他實驗玻璃器進行滅菌。
采樣、培養
取水，湖水，廢水三樣約2～3滴于3支已滅菌的乳糖膽鹽液體培養基試管中，貼好標簽（采樣時間、人物、溫度，采樣地點及天氣情況），塞好棉塞，于恒溫箱（37℃）培養18～24小時；
觀察產氣情況、稀釋
①觀察產氣管有無氣柱，標記陽性管數。
②樣品稀釋：
對已滅菌的5只試管編號（分別為1、2、3、4、5號），從樣液試管取1mL樣品液放入盛有9mL生理鹽水的試管中為1號試管，換只移液管，按上述方法依次配置5份10倍系列稀釋液。貼明標簽。
劃線、涂布
①涂布平板法：
將已熔化的營養瓊脂培養基倒入無菌平皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將定量的含大腸菌群的污水滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個平板表面，置培養箱中37℃培養24小時。經培養后挑取單個菌落。
涂布平板法操作：
1.取少量菌液（不超過0.1ml），滴加到培養基表面；
2.用滅菌過的涂布棒或次性涂布棒將菌液均勻地涂布在培養基表面。涂布時可轉動培養皿，使涂布均勻。
注意：1.將涂布器末端浸在盛有體積分數為70%的酒精的燒杯中。取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
2.操作中定要注意防火！不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。）
②平板劃線法：
經培養后挑取單個菌落，接種環以無菌操作沾取少許菌落，在無菌伊紅美蘭瓊脂培養基平板表面進行連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能分散。在37℃經培養24小時后，可在平板表面得到單菌落。（有時這種單菌落并非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。）
鑒定
觀察EMB平板，菌落呈紫黑色，具有或略有金屬光澤，或者呈淡紫紅色，僅中心顏色較深，選取符合上述特征的單個菌落進行革蘭氏染色，鏡檢（油鏡）觀察是否為無芽孢的革蘭氏陰性短桿菌。
培養
a.將菌落轉入裝有玻璃珠的滅菌錐形瓶中調節酸堿度為7，充分搖勻備用。
b.液體發酵：取處理好的樣品液1mL加入滅菌的乳糖膽鹽液體培養基中。搖勻后置培養箱中37℃培養24小時
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
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