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技術文獻

蛋白提取操作時的注意事項
閱讀次數：1876 發布時間：2021/3/16 9:29:55

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避免蛋白降解
總體規則：蛋白酶普遍存在，在提取蛋白質的步驟中，早些抑制，經常抑制
分裝蛋白溶液，儲存于不同的溫度和不同的緩沖液中，測蛋白活性，找出適儲存條件。
冷藏，并加入穩定劑。這些穩定劑般都能充分保持蛋白的生物學活性。
將蛋白溶液儲于50%（V/V)的甘油或懸于硫酸銨（3.2M）中，避免凍存
冰結晶會造成物理剪切及蛋白變性。
避免酶的反復凍融，如果酶需要凍存，分裝成小管后凍存。

蛋白質的儲存
蛋白樣品在液氮中速凍，拿出后加入10-20%的甘油，長期儲存
整個實驗過程中，都要將蛋白樣品置于冰上
從母管中吸取不同的蛋白時，都要用新鮮的槍頭
不要將未用的溶液倒回母管
戴手套操作，避免蛋白交叉污染，或是蛋白酶的污染
避免劇烈的震蕩，避免溶液中混入蛋白變性劑
實驗的過程中應避免灰塵進入，灰塵包含60%的肌氨酸

操作過程中
操作時總是小體積小量的操作，避免污染，并且動作要快
a：此類蛋白酶在活性中心包含絲氨酸和組氨酸。
b：此類蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巰基，-SH-）。
c：此類蛋白酶在活性中心包含金屬離子（如：n2+，Ca2+，Mn2+）。
d：此類蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。

試劑的使用常識：
（1）試劑切忌與手接觸（有些試劑有強腐蝕性、等特性）。
（2）要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，絕對不允許用同種工具同時連續取用多種試劑。取完種試劑后，應將工具洗凈（藥勺要擦干）后，才可取用另種試劑。
（3）試劑取用后定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后請及時將瓶放回原處，以免遺忘，帶來不便。
（4）已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內（怕產生原試劑的再次污染）。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司