培養基滅菌是否徹底，影響因素很多，除了培養基內雜菌的種類和數量，滅菌溫度的高低，時間長短外，還取決于：
1. 營養成分的保持
濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養基的營養成分也遭到了定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當數量被破壞。在熱的作用下某些營養成分還可能因受熱而相互之間發生反應，造成培養基中原有營養成分的數量變化，因而影響培養基質量。
2. 微生物的耐熱性
細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少到所規定數目的時間。
3. pH值
pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時，微生物不易死亡。pH<6.0時，微生物比較容易死亡，此時H+很容易滲入微生物的細胞，從而改變細胞的生理反應，促使其死亡。所以培養基的pH越低，所需的時間也越短。
4. 培養基成分
油脂、糖類及
蛋白質等組成的高濃度有機物會包于細胞的周圍形式層薄膜、影響熱的傳導。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性，滅菌較易。例如：大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡，在30%糖液中需30分鐘才死亡。般糖類含量較多的時候好選用115℃，30分鐘；般的培養基可選擇121℃，20分鐘。
5. 泡沫
泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進去，殺死其中的雜菌。
6. 顆粒
顆粒小，容易滅菌，顆粒大，則難滅菌。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養基，可用粗濾的方法（不應影響培養基質量）予以除去，培養基結塊會造成培養基滅菌的不徹底。
7. 滅菌鍋內空氣是否排凈
這個是影響滅菌是溫度和壓力比例關系的要點，同樣達到了相同的壓力的情況下，如果空氣未能排凈，也就是說不是純蒸汽滅菌，此時的溫度不定能達到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
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