工程細胞株開發(fā)涉及細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染，單細胞克隆及單克隆源性驗證，
蛋白表達及結(jié)構(gòu)特征篩選及鑒定，蕞終獲得優(yōu)-質(zhì)的細胞株。
穩(wěn)定細胞株廣泛用于許多重要的應用，包括生物制品（如重組蛋白和單克隆
抗體）生產(chǎn)、藥物篩選和基因功能研究。開發(fā)穩(wěn)定細胞株的過程通常始于將所需的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至選定的宿主細胞，一般是 CHO 或 HEK 293 細胞。轉(zhuǎn)染后，研究人員隨后篩選和定量分析高表達的細胞克隆。
一旦檢測到這些高產(chǎn)細胞株，便進一步對這些細胞和其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進行驗證。傳統(tǒng)上用于細胞株開發(fā)的手動篩選方法耗時且需要大量勞力，因此對于此類工作，存在對高通量、自動化解決方案的巨大需求。
細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及培養(yǎng)基優(yōu)化
細胞培養(yǎng)是細胞株開發(fā)的基礎(chǔ)，無論是細胞轉(zhuǎn)染，培養(yǎng)基優(yōu)化，還是抗體表達檢測等實驗都在細胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上完成。細胞培養(yǎng)是一個長流程，精細，耗費時間和人力的流程，定期的細胞計數(shù)接種，細胞換液，細胞轉(zhuǎn)染等繁瑣的實驗對工作人員的挑戰(zhàn)大，且在高通量的人工操作中易帶入污染而導致細胞培養(yǎng)及篩選的失敗。高通量、標準化、自動化的細胞培養(yǎng)能幫助我們在獲得更準-確的結(jié)果的同時加速細胞株開發(fā)進度。
01、透射光細胞計數(shù)（無標記計數(shù)法）
透射光分割（分析）算法提高了不同細胞類型計數(shù)的準-確性，通常用于對未染色的活細胞或固定細胞進行成像。另外還有使用熒光方法檢測細胞核或細胞體的標準細胞計數(shù)方法。
02、圖像細胞計數(shù)法
圖像細胞計數(shù)法是一種將低倍率顯微鏡與成像和分析工具相結(jié)合的細胞計數(shù)技術(shù)。圖像細胞計數(shù)法有助于在單次檢測中提供關(guān)于大量細胞的細胞特性信息。圖像細胞計數(shù)法可用于無標記或熒光標記細胞，可對一個細胞群多次執(zhí)行，以隨時提供關(guān)于細胞動力學的信息。
03、活細胞成像
活細胞成像是通過顯微觀察研究活細胞的細胞結(jié)構(gòu)和功能。它可以實時顯示和定量細胞的動態(tài)變化過程。活細胞成像包含多種方向和生物應用 — 無論是對活細胞進行長-期動力學檢測，還是進行熒光標記。
04、如何計算轉(zhuǎn)染效率
在使用轉(zhuǎn)染的細胞株進行特定檢測，測量轉(zhuǎn)染效率可為研究人員提供基因編輯產(chǎn)率的早期指示。使用透射光或能體現(xiàn)轉(zhuǎn)染的熒光通道均可獲得高質(zhì)量圖像。圖像分析軟件可識別每個細胞并進行計數(shù)，判斷細胞是否為 GFP 陽性。然后，可以根據(jù)比值來計算轉(zhuǎn)染效率。
05、支原體檢測
支原體是蕞小且蕞簡單的原核生物，也是細胞培養(yǎng)物中常見的污染物。支原體污染的征兆包括增殖率降低以及基因表達等細胞反應變化。
細胞株鑒定
工程細胞株開發(fā)的主要目的是通過高通量篩選手段獲得數(shù)株高產(chǎn)穩(wěn)定表達的細胞株，為后續(xù)的工藝開發(fā)及優(yōu)化提供基礎(chǔ)。細胞株鑒定是對細胞株的表達量，表達抗體的生物活性、糖型結(jié)構(gòu)等多種指標進行高通量篩選，通過綜合評估及分析篩選出候選細胞株。
細胞株鑒定的方法決定了細胞株開發(fā)的效率和效果，穩(wěn)定標準的篩選方法讓我們能獲得更準-確的實驗結(jié)果，其決定了篩選的效果，而高通量快速的檢測手段決定了篩選的效率，讓我們更快的篩選到目的細胞株。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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