日韩精品一区二区视频,国精一区二区AV在线观看网站,国产精品免费aⅴ片在线观看

技術(shù)文獻(xiàn)

核蛋白的免疫熒光定位實驗
閱讀次數(shù)：1557 發(fā)布時間：2021/7/21 10:47:11

分享到：

實驗方法原理：免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是采用熒光素標(biāo)記的已知抗體（或抗原）作為探針，檢測待測組織、細(xì)胞標(biāo)本中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體復(fù)合物帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由于受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素發(fā)出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原（或抗體）的所在位置及其性質(zhì)，并可利用熒光定量技術(shù)計算抗原的含量，以達(dá)到對抗原物質(zhì)定位、定性和定量測定的目的。

實驗材料：核蛋白
試劑、試劑盒：甲醇 PB 一抗二抗
儀器、耗材：顯微鏡玻片蓋玻片滴管

實驗步驟：
1.在22x22 mm 的1.5號蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞。理想條件下細(xì)胞應(yīng)長到50%~70%匯合。
2. 在-20℃用100%甲醇固定細(xì)胞3分鐘。
3.用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分鐘。
4.在濕盒里以適當(dāng)濃度的一抗室溫溫育1小時。
5.用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分鐘。
6.在濕盒里與稀釋為4 ug/ml 的熒光標(biāo)記二抗室溫溫育1小時。
7.用PBS洗四次，每次10分鐘。
8.用封片劑將蓋玻片封在載波片上，用干凈的指甲油將蓋玻片封邊，防止蓋玻片滑動。

注意事項：
1.要在蓋玻片一邊角落做記號，以知道細(xì)胞在蓋玻片的那一面。
2.一抗的濃度需要經(jīng)過實驗摸索確定。
3.第四步中如果用22×22 mm 蓋玻片，則在蓋玻片上加30 ul 稀釋的抗體，并且將蓋玻片倒置在玻璃載玻片上，然后將載玻片放到濕盒里，在室溫溫育。

其他：
核蛋白是指在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)合成，然后運輸?shù)胶藘?nèi)起作用的一類蛋白質(zhì)。如各種組蛋白、DNA合成酶類、RNA轉(zhuǎn)錄和加工的酶類、各種起調(diào)控作用的蛋白因子等。核蛋白一般都含有特殊的氨基酸信號序列，起蛋白質(zhì)定向、定位作用。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司