冷凍干燥菌種的轉接技術建議用下列方法恢復培養冷凍干燥保藏的菌種。
一、安瓶管開封
1．用浸過70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
2．用火焰將安瓿管頂端加熱。
3．滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。
4．用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢復培養
1．用無菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養基，滴人安瓿管內，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養基內，然后在建議的溫度下培養。
3．若未能活化，或活化后有疑問時，請于收到菌種1個月內，通知保藏中心，經查證無誤后，即免費補寄。
三、注意事項
1．菌種活化，請將安瓿管保存在6一10℃的環境下。
2．厭氧菌的培養，如無特別說明，自開封至接種完成，均需以無氧氣體充填，以保持厭氧狀態。
3．某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需連續兩次繼代培養才能正常生長，此時請將步驟二(2)重復一次。
液氮超低溫保藏程序1、容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。
2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鐘，沖洗干凈，棄去含有藍色染料的安培瓶，其余的安培瓶備用。
3、打印標簽（激光打印）。
4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘，干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121℃滅菌30分鐘。
5、保藏菌菌齡：處于da
生長量階段或對數生長-期后期。
6、保護劑：選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護劑。
1）甘油的準備：在121℃滅菌15分鐘，2-8℃貯存。甘油一般以兩倍終所需濃度的水溶液保存，然后與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液，則以終所需濃度的水溶液保存。
2）二甲基亞砜：用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞砜漂洗。無菌的二甲基亞砜以10-15ml裝量2-8℃避光保存。
7、分裝：在無菌條件下，將細胞懸液（從平板上打下直徑為5cm的菌塊）分裝于安培瓶中，并注入保護劑，擰緊螺旋蓋。
8、將安培瓶固定在鋁夾上，貼好標簽。為了便于取用，一般一個鋁夾上僅放一個菌株。
9、將控溫系統先預冷到4℃，再將鋁夾放入其中。以每分鐘1℃降溫至-40℃，然后以每分鐘10℃降溫至-90℃。降溫以后，將鋁夾轉移至處于液氮中的儲存器中保存。
10、菌種的復活：將液氮保藏的菌種取出，迅速放入37℃水浴中解凍。一般需2至2.5分鐘,等完-全解凍后，再及時轉接到合適的培養基中培養。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
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