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遠慕分享:傷口愈合/細胞劃痕實驗新方法分享
閱讀次數(shù):887 發(fā)布時間:2019/12/12 10:03:14
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細胞劃痕實驗是一種操作簡單,經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移的體外試驗方法。

這種方法的原理是,當(dāng)細胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。

基本的步驟包括“劃痕”的制造,細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。
 
優(yōu)點:
1,在一定程度上模擬了體內(nèi)細胞遷移的過程。
2, 非常適合研究細胞與胞外基質(zhì)(ECM),細胞與細胞之間相互作用引起的細胞 遷移。
3,與包括活細胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容,可用于分析細胞間的相互作用。

4,研究細胞遷移的體外實驗中*簡單的方法。

傳統(tǒng)實驗方法

實驗步驟:
1,培養(yǎng)板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一 個視野)。
2,細胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底)。
3,,細胞鋪滿板底后,用1ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結(jié)果,這也是該方法的缺陷。)
4,吸去細胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。
5,加入無血清培養(yǎng)基,拍照記錄。
6,將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),每隔4-6小時取出拍照。

7,根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。

Culture Insert方法
1,準備細胞,培養(yǎng)液,culture Insert。
2,將細胞接種于Dish中間的Insert,細胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500μm寬度的劃痕。
3,每隔4-6小時拍照記錄。

4,根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。

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