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如何選擇合適的植物培養(yǎng)基?
閱讀次數(shù):509 發(fā)布時(shí)間:2022/1/11 10:38:05
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植物組織培養(yǎng)基包括多種成分:無機(jī)鹽、維生素、氨基酸、生長調(diào)節(jié)劑、糖類、瓊脂(或結(jié)冷膠)和水。所有這些成分在植物組織培養(yǎng)中至少有1種或多種作用。

植物組織培養(yǎng)基中的礦質(zhì)元素進(jìn)入植物細(xì)胞后用于合成有機(jī)分子或作為酶反應(yīng)中的催化劑。可溶性鹽離子在植物電離分子運(yùn)輸中作為平衡離子,滲透壓的調(diào)節(jié)以及維持植物體電化學(xué)勢的平衡都起著重要的作用。

氮、硫和磷是蛋白質(zhì)和核酸的組成成分。鎂離子和許多的微量元素是許多酶和細(xì)胞器的基本組成部分,因此在多種反應(yīng)中起著重要的催化作用。

鈣離子和硼酸主要存在植物的細(xì)胞壁中,尤其是鈣離子在維持生物膜穩(wěn)定性起著重要作用。相反,鉀離子和氯化物在滲透調(diào)節(jié)中起著重要作用,參與維持電化學(xué)勢的平衡,同時(shí)也是許多酶的活化劑。

下面對常用培養(yǎng)基做一個(gè)介紹:


MS培養(yǎng)基,初是Murashige 和Skoog 于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的,經(jīng)過改良后,現(xiàn)可以用于多種植物的組織培養(yǎng),如馬鈴薯、胡蘿卜、甘藍(lán)等,許多研究者根據(jù)不同的試驗(yàn)需要,先后研發(fā)了改良MS培養(yǎng)基包括含1/2大量元素、含3/4大量元素、用NaNO3替代NH4NO3、不含NH4NO3、含1/2NH4NO3和KNO3的培養(yǎng)基等,一般需要根據(jù)具體的試驗(yàn)材料和試驗(yàn)?zāi)康倪x用具體的培養(yǎng)基。

N6培養(yǎng)基,被定義用來改善水稻花粉愈傷組織的形成、生長和分化。NH4+離子濃度的適范圍是7.0 mM(或3.5mM(NH4)2SO4))。高濃度的銨鹽會(huì)顯著抑制水稻花粉的生長和分化。KNO3和培養(yǎng)基中其他成分的濃度不會(huì)影響花粉的生長。

B5培養(yǎng)基是1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的,雙子葉植物在B5培養(yǎng)基上生長更適宜。B5(Gamborg)培養(yǎng)基的主要特點(diǎn)是含有較低的銨,這是因?yàn)殇@可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用。

NB培養(yǎng)基,為N6培養(yǎng)基大量元素和B5培養(yǎng)基的微量元素和維生素混合物。

木本植物培養(yǎng)基也叫WPM培養(yǎng)基,是1981年由Lloyd和McCown為山月桂莖尖培養(yǎng)業(yè)設(shè)計(jì),根據(jù)MS培養(yǎng)基改良而來,相對MS培養(yǎng)基而言,使用了硫酸鉀替換了硝酸鉀,硝酸銨的含量也降低到了MS培養(yǎng)基的1/4,氮鹽也主要以硝酸鈣的形式供應(yīng),現(xiàn)主要用于木本植物的組織培養(yǎng)。

配置培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)


1、調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液(一般剛配好的培養(yǎng)基都是偏酸),逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中,邊滴邊攪拌,并隨時(shí)用精密的pH試紙(5.4~7.0)測培養(yǎng)基的pH,一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止(培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在5.8)。在這里要注意的是,許多同學(xué)在做培養(yǎng)基時(shí)明明PH值調(diào)到了5.8但是還是不凝固,這個(gè)原因可能是:
a. 先檢查培養(yǎng)基組分中瓊脂的用量和質(zhì)量
b. 如果瓊脂沒有問題,滅菌時(shí)間過長,一般在0.15MPa超過1小時(shí)后易凝固不良。
c. 如果以上都正常,我們還要考慮稱量工具是否準(zhǔn)確,有些小市場買的稱量工具不是很準(zhǔn)確,建議稱量工具到正規(guī)廠家或業(yè)商店購買。

2、培養(yǎng)基的分裝溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上,因?yàn)檎吃谄靠谌菀孜廴尽?br />
3、pH不要調(diào)過頭,以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。

4、需不斷攪拌,以防瓊脂糊底燒焦。

5、嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配方配制
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