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技術(shù)文獻(xiàn)

遠(yuǎn)慕生物：血紅蛋白測定哪些方法？
閱讀次數(shù)：1577 發(fā)布時間：2020/7/10 17:12:13

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1.氰化高鐵血紅蛋白HiCN測定法：除SHb外
推薦參考方法，具有操作簡單、顯色快、結(jié)果穩(wěn)定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點(diǎn)。致命的弱點(diǎn)是氰-化鉀(KCN)試劑有劇毒，使用管理不當(dāng)可造成公害。
氰化高鐵血紅蛋白測定法操作

(1)直接測定法
①加轉(zhuǎn)化液：試管內(nèi)加5ml　HiCN轉(zhuǎn)化液
②采血與轉(zhuǎn)化：取全血20μl，加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部，用上清液反復(fù)沖洗吸管3次，充分混合，靜置5min。
③測定：以符合WH0標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)，波長540nm處，光徑(比色杯內(nèi)徑)1.000cm，HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水調(diào)零，測定吸光度(A)。
④計(jì)算：根據(jù)樣本的吸光度(A)直接計(jì)算出血紅蛋白濃度(g/L)
(A為測定管吸光度，44為毫摩爾消光系數(shù)，64458/1000為1mol/L Hb溶液中所含Hb克數(shù)，251為稀釋倍數(shù)。)

(2)HiCN標(biāo)準(zhǔn)液比色法測定
HiCN參考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)，分別測得540nm處的吸光度，以參考液血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或求出K值。
①標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計(jì)算
②樣本吸光度
③通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣本血紅蛋白濃度，或用K值計(jì)算，血紅蛋白濃度Hb(g/L)=K×A。

注意事項(xiàng)
(1)HiCN貯存：轉(zhuǎn)化液貯存在棕色有塞玻璃瓶中，不能貯存在塑料瓶中，否則會使CN-丟失，測定結(jié)果偏低。HiCN轉(zhuǎn)化液在4℃保存一般可數(shù)月，不能在0℃以下保存，因?yàn)榻Y(jié)冰可使高鐵氰-化鉀還原，試劑失效。
(2)標(biāo)本：異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細(xì)胞數(shù)超過30×109/L、脂滴等可產(chǎn)生濁度，干擾Hb測定。
(3)HiCN轉(zhuǎn)化液是一種低離子強(qiáng)度、pH近中性的溶液(7.2±0.2)。樣本中白細(xì)胞過高或球蛋白異常增高時，HiCN比色液會出現(xiàn)渾濁。
(4)氰-化鉀試劑是劇，測定后的廢液應(yīng)收集于廣口容器中，首先以水稀釋廢液(1:1)，再按每升上述稀釋液加次氯酸鈉35ml，充分混勻，敞開容器，放置15h以上，使CN-氧化成C02和N2揮發(fā)，或水解成C032-和NH4+，再排入下水道。廢液不能直接與酸性溶液混合，因?yàn)?span >氰化-鉀遇酸可產(chǎn)生劇毒的氰氫酸氣體。

2.十二烷基-硫酸鈉血紅蛋白SDS測定法：
具有操作簡單、呈色穩(wěn)定、準(zhǔn)確性和精確性符合要求、無公害等優(yōu)點(diǎn)。但由于摩爾消光系數(shù)尚未*后確認(rèn)，不能直接用吸光度計(jì)算Hb濃度，而且SDS試劑本身質(zhì)量差異較大，會影響檢測結(jié)果。

3.HiN3吸收峰542nm，顯色快，結(jié)果穩(wěn)定。