詳細(xì)內(nèi)容

通用名稱(chēng)：布魯氏/菌檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
英文名稱(chēng)：Br/ucella /Detection Kit (Real-Time PCR Method)
包裝規(guī)格：50T/盒
預(yù)期用途：布魯氏/菌病是由布魯氏/菌（Bru/cella）引起的畜源性人畜共患傳染病，在牛、羊、豬中常發(fā)生，患病家畜是人類(lèi)布魯氏/菌病的主要傳染源。近年來(lái)全國(guó)各地布魯氏/菌病疫情有上升的趨勢(shì)，給畜牧業(yè)發(fā)展及人類(lèi)身體健康帶來(lái)大的危害和威脅，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，主要用于布魯氏/菌的定性篩查檢測(cè)。

【使用方法】

一、試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據(jù)待測(cè)樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照的數(shù)量，按下表1單反應(yīng)體系配制方法，取相應(yīng)量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應(yīng)分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時(shí)離心后備用。

表1：?jiǎn)畏磻?yīng)體系配制方法

二、樣本準(zhǔn)備（在樣本準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測(cè)，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對(duì)照、待測(cè)樣本、陽(yáng)性對(duì)照各5 μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行上機(jī)。

三、PCR（在核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

1. 將上述PCR反應(yīng)管按照實(shí)驗(yàn)布局依次放入PCR儀對(duì)應(yīng)檢測(cè)孔內(nèi)，并記錄順序。

2. 按表2設(shè)置PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)

【結(jié)果分析】

表3：結(jié)果分析表

【注意事項(xiàng)】

1. 使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)嚴(yán)格按照國(guó)家有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測(cè)結(jié)束后，應(yīng)立即對(duì)工作臺(tái)進(jìn)行清潔消毒。

3. 吸取反應(yīng)液時(shí)，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。上機(jī)，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

4. 檢測(cè)過(guò)程中使用過(guò)的吸頭，應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內(nèi)，檢測(cè)結(jié)束的PCR反應(yīng)管，切忌開(kāi)蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。

6. 試劑使用應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。不同批號(hào)的試劑請(qǐng)勿混用，并在有效期內(nèi)使用。

【儲(chǔ)存條件與有效期】

試劑盒應(yīng)置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個(gè)月；

試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過(guò)5次。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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