詳細內(nèi)容

通用名稱：豬細小病毒檢測試劑盒（實時熒光PCR法）

英文名稱：Porcine pamovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

規(guī) 格：50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒利用實時熒光PCR原理，定性檢測豬細小病毒，對豬細小病毒引起的疾病診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義。

【檢驗原理】

本試劑盒針對豬細小病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含豬細小病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

【使用方法】

一、試劑準備（在試劑準備區(qū)進行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據(jù)待測樣本、陰性對照、陽性對照的數(shù)量，按下表1單反應(yīng)體系配制方法，取相應(yīng)量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應(yīng)分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應(yīng)體系配制方法

二、樣本準備（在樣本準備區(qū)進行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到擴增區(qū)進行上機。

三、PCR（在核酸擴增區(qū)進行）

1. 將上述PCR反應(yīng)管按照實驗布局依次放入PCR儀對應(yīng)檢測孔內(nèi)，并記錄順序。

2. 按表2設(shè)置PCR擴增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴增相關(guān)參數(shù)

【結(jié)果分析】

表3：結(jié)果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應(yīng)嚴格按照國家有關(guān)基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結(jié)束后，應(yīng)立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應(yīng)液時，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。上機，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內(nèi)，檢測結(jié)束的PCR反應(yīng)管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內(nèi)使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應(yīng)置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司

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