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產品名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒美洲型經典株、高致病性變異株、類NADC-30株三重熒光RT-PCR檢測試劑盒

規 格：50T/盒
反應體積：25μL
試劑類型：液體

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型NADC30株(NADC30-like PRRSV)，用于豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型NADC30株(NADC30-like PRRSV)感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。本產品不提供活體樣品做陽性對照，僅提供人工合成的特異性DNA///片段標準品作為陽性對照，僅限于業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療用途。

【儲存、有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融少于7次，有效期12個月。

【技術原理】

采用SYBR Green一步法熒光定量RT-PCR技術，結合特異性擴增引物對目的基因進行體外擴增，本試劑盒具有靈敏性高、特異性強、反應時間短等優點，操作簡便，污染概率低等特點。

【使用方法】

一、試劑準備（在試劑準備區進行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數量，按下表1單反應體系配制方法，取相應量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應分裝到PCR反應管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應體系配制方法

二、樣本準備（在樣本準備區進行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應管轉移到擴增區進行上機。

三、PCR（在核酸擴增區進行）

1. 將上述PCR反應管按照實驗布局依次放入PCR儀對應檢測孔內，并記錄順序。

2. 按表2設置PCR擴增循環參數。

表2：PCR擴增相關參數

【結果分析】

表3：結果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關基因擴增檢驗實驗室管理規范進行管理。

2. 各區域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結束后，應立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡。上機，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發造成結果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內，檢測結束的PCR反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復凍融次數不宜超過5次。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司

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