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產品名稱：豬傳染性胃腸炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒

規 格：50T/盒
反應體積：25μL
試劑類型：液體

【產品簡介】：

傳染性胃腸炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus，TGEV)是一種RNA 病毒，會引起豬流行性腹瀉，是一種急性腸道傳染病。本病與傳染性胃腸炎很相似，在我國多發生在每年 12 月份至翌年 1～2 月，夏季也有發病的報道�？砂l生于任何年齡的豬，年齡越小，癥狀越重，死亡率高，給養殖業帶來較大的經濟損失，因此快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用。本產品就是以探針法熒光定量 RT-PCR 技術為基礎開發的門檢測豬傳染性胃腸炎病毒型的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2. 引物和探針經過優化，分析靈敏性高。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據豬傳染性胃腸炎病毒高度保守區設計，不會跟其他病毒的 RNA 發生交叉反應。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為 5個數量。

6. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。

7. 本產品只能用于科研。

【檢驗原理】：

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，設計一對豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)特異性引物，結合一條特異性探針，用一步法熒光RT-PCR技術對豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)的核酸進行體外擴增檢測。

【使用方法】

一、試劑準備（在試劑準備區進行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數量，按下表1單反應體系配制方法，取相應量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應分裝到PCR反應管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應體系配制方法

二、樣本準備（在樣本準備區進行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應管轉移到擴增區進行上機。

三、PCR（在核酸擴增區進行）

1. 將上述PCR反應管按照實驗布局依次放入PCR儀對應檢測孔內，并記錄順序。

2. 按表2設置PCR擴增循環參數。

表2：PCR擴增相關參數

【結果分析】

表3：結果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關基因擴增檢驗實驗室管理規范進行管理。

2. 各區域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結束后，應立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡。上機，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發造成結果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內，檢測結束的PCR反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復凍融次數不宜超過5次。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司

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